В конце 1980−х гг. специалист по трансплантации органов Джозеф Ваканти (Joseph P. Vacanti) из Гарвардской медицинской школы и химик-полимерщик Роберт Лангер (Robert S. Langer) из Массачусетского технологического института провели следующий эксперимент.

 

Они поместили клетки определенной части тела в заранее изготовленную биодеградируемую форму, намереваясь вырастить в ней орган для трансплантации.

Ученые опирались на тот факт, что клетки, формирующие ткани живого организма, постоянно обмениваются сигналами и часто перемещаются с места на место в пределах некой образуемой ими трехмерной структуры. Каждая клетка заранее «знает» свое место и роль в будущем организме. Следовательно, если поместить правильно подобранный набор отдельных клеток, полученный путем дезинтеграции ткани, в каркас подходящей формы, то они самоорганизуются и воссоздадут искомый орган.

 

Первые успешные эксперименты по регенерации кусочков ткани печени из отдельных клеток, проведенные Ваканти и Лангером, послужили стимулом к разработке аналогичных методик для получения других сложных органов – сердечной мышцы, костной ткани и зубов. В 2000 г. Памела Йелик (Pamela C. Yelick) и Джон Бартлет ( John D. Bartlet) из Института Форсайта в Бостоне попытались вместе с Ваканти реконструировать зубы свиньи. (У этих животных, как и у человека, закладываются два набора зубов – молочные и постоянные).

 

В работе принимал участие и один из авторов статьи (Янг). В качестве исходного материала были взяты непрорезавшиеся третьи моляры шестимесячных поросят. Чтобы получить однородную смесь клеток зубной эмали (происходящих из эпителия) и пульпы (происходящих из мезенхимы), зубы раздробили как можно мельче и затем обработали ферментами. Каркас в форме зуба изготовили из биодеградируемого полиэфирного материала и покрыли веществом с хорошими адгезивными свойствами, чтобы клетки легко на нем адсорбировались. Затем в емкость поместили набор клеток и имплантировали его в сальник крысы (хорошо снабжаемую кровью жировую ткань, окружающую кишечник). Выбор места трансплантации крайне важен, поскольку развивающиеся зубы должны иметь необходимые питательные вещества и кислород.

 

Спустя какое-то время после операции каркас рассосался, вместо него образовалась новая ткань, а через 20–30 недель появилась структура, сходная по форме и составу с настоящим зубом (причем развились все основные его компоненты: эмаль, дентин, пульпа и зачатки корней). Казалось очевидным, что «зубы» сформировались в организме крысы в результате самоорганизации соответствующих клеток внутри каркаса. Но чтобы исключить элемент случайности, было решено провести еще один эксперимент. Группа ученых из Института Форсайта использовала гомогенат зубной ткани – эпителиальные и мезенхимные клетки, полученные из первых и вторых зубов, а также моляров крыс. На этот раз их культивировали в течение шести суток, и только затем перенесли в каркас и имплантировали. По прошествии 12 недель сформировавшиеся структуры изъяли и тщательно исследовали. И вновь обнаружилось, что внутри формы образовалось нечто вроде зубов с эмалью, дентином и пульпой. Полученные результаты подтвердили предположение о самоорганизации клеток при формировании зубов. Кроме того, они показали, что предварительное культивирование не оказывает отрицательного воздействия на процесс, что очень важно для конструирования зубов человека, предполагающего использование клеток самого пациента. И, наконец, была продемонстрирована возможность регенерации зубов еще одного млекопитающего.

 

Ученые из Института Форсайта научились воссоздавать большинство типов тканей зуба, используя в качестве исходного материала соответствующие клетки взрослого организма. Однако, будучи предоставлены самим себе, они структурировались правильно только на 15–20%. Поэтому ученые продолжают работать над созданием прецизионных методов размещения различных типов клеток в матрице, с тем чтобы получать полноценные зубы.

В то же время исследователи не исключают возможного участия в формировании зуба стволовых клеток, которые, возможно, содержатся в зачатках третьего моляра, клетки которого используются для образования новой ткани. Если ученые докажут этот факт, то процесс воссоздания челюсти с использованием матрицы значительно ускорится.

 

Шарп и его коллеги из Королевского колледжа в Лондоне пытаются воспроизвести в лабораторных условиях естественный рост зуба с эмбрионального уровня. Для этого необходимо выяснить принципы регуляции первых этапов формирования зубов и найти источник клеток, образующих эпителий и мезенхиму ротовой полости зародыша. Исходным материалом для исследований служат клетки (как стволовые, так и обычные) эмбрионов мышей и взрослых особей. С их помощью исследователи намереваются выяснить роль клеток разного типа в процессе формирования зубов от начала до конца. Как правило, клетки мезенхимы подвергают центрифугированию, пока они не образуют плотный осадок. Последний покрывают слоем эпителиальных клеток и в течение нескольких суток культивируют такой «бутерброд», отслеживая активность различных генов, чтобы уловить первые признаки образования зубов. Затем зачатки имплантируют в хорошо снабжаемый кровью орган взрослого животного (например, в почки) и наблюдают за процессом на протяжении 25 суток.

 

В таких условиях происходит формирование зубов, однако только в том случае, если эпителиальные клетки взяты от эмбриона, а среди клеток мезенхимы имеется хотя бы небольшое количество стволовых. Когда вместо клеток мезенхимы были взяты стволовые клетки костного мозга взрослого животного, из трансплантированного материала также сформировался правильный в структурном отношении зуб. Следовательно, при конструировании зубов эмбриональные клетки мезенхимы можно заменить стволовыми клетками взрослого организма.

 

С заменой эпителиальных клеток эмбриона дело обстоит сложнее. Дело в том, что они содержат уникальный набор необходимых для одонтогенеза сигнальных молекул, которые после рождения исчезают из тканей полости рта. Шарп и его сотрудники пытаются найти во взрослом организме эффективные заменители. Они уже получили обнадеживающие результаты, используя комбинацию стволовых клеток взрослых животных и эпителиальные клетки полости рта эмбриона. Очень важно, что образующиеся таким образом зубы имеют нормальный для мышей размер, они окружены костной и соединительной тканями и проявляют первые признаки образования корней. Теперь нужно попробовать получить такие же результаты in vivo, т.е. вырастить зубы там, где им положено быть. У эмбриона челюсти, мягкие ткани, костное вещество и сами зубы развиваются одновременно, не подвергаясь никаким аномальным внешним воздействиям. Однако рот взрослого животного представляет собой уже сформировавшуюся конструкцию, и неизвестно, будут ли в таких условиях поступать сигналы, необходимые для развития имплантанта.

 

Чтобы прояснить все сомнительные моменты, Шарп изъял зачатки зубов у эмбриона мыши и трансплантировал их в мягкую ткань верхней челюсти взрослого животного между молярами и резцами, где зубы, о идее, не растут. Трансплантант зафиксировали в небольшом надрезе с помощью хирургического клея. После операции мышам давали только мягкую пищу. Через три недели в диастеме прорезались зубы. Они росли в правильном направлении, имели надлежащий размер и прикреплялись к кости с помощью мягкой соединительной ткани (рис.).

 

На срезе области диастемы в верхней челюсти животного виден зуб, выступающий из десны (второй зуб, расположенный на рисунке выше и правее первого, только формируется). Видна пульпа прорезавшегося зуба. Красным окрашены твердые ткани, эмаль и дентин. Корней у зуба нет, он фиксируется в челюсти с помощью мягкой соединительной ткани.

Таким образом, условия, в которые попадает зачаток зуба при трансплантации в ткань взрослого животного, вполне приемлемы для его нормального развития. Однако на пути к искусственному выращи- ванию человеческого зуба нас, несомненно, ждет еще не один крутой поворот.

 

 

Для успешного конструирования зубов требуется гораздо меньше времени, чем для воссоздания других органов. Разработка простых методов отслеживания процесса остается пока проблемой. Другая задача – предсказание и контроль формы и размера зубов – близка к решению. Зачатки моляров и резцов, выращенные в культуре, легко различимы как по внешнему виду, так и по активности их генов, чего нельзя сказать о премолярах и клыках.

 

Зубы, формирующиеся у взрослых мышей из трансплантированных зачатков зубов эмбрионов, соответствовали по форме тем, которые должны были вырасти у них на том же месте. Это свидетельствует о том, что информация о форме будущего зуба уже заложена в нем изначально. Специалистам по тканевой инженерии нужно в деталях разобраться в природе формообразующих сигналов, чтобы использовать их при конструировании зубов человека.

 

Несмотря на успехи исследователей, все зубы, выращенные в лабораторных условиях, не имели полноценных корней (они образуются в последнюю очередь, уже в ходе прорезывания зубов). Остается еще один неясный момент – сколько времени понадобится на то, чтобы у человека вырос полноценный зуб из имплантанта. Известно, что не только молочный, но и второй набор зубов тоже закладывается в период эмбрионального развития, они прорезываются на 6–7−м году жизни, а зубы «мудрости» – на 20−м. Опыты с регенерацией зубов у животных свидетельствуют, что все происходит гораздо быстрее, однако неизвестно, когда процесс завершается, и эмаль полностью затвердевает.

 

Серьезной задачей представляется также поиск легкодоступного источника клеток пациента, которые стали бы приемлемым исходным материалом для будущего зуба. Нужно, чтобы имплантант не вызывал иммунного ответа, кроме того,протезы должны обладать теми же характеристиками. Шарп и его сотрудники обнаружили, что вместо эмбриональных клеток мезенхимы могут быть использованы и соответствующие стволовые клетки из костного мозга взрослого организма. Заменитель эмбриональных эпителиальных клеток пока не идентифицирован. Обнадеживает то, что стволовые клетки обнаружены и в других тканях взрослого организма, которые имеют эпителиальное происхождение (например, в коже и волосах). Вероятно, их можно будет генетически видоизменить так, чтобы они индуцировали сигналы к одонтогенезу.

 

Наиболее подходящим источником необходимых клеток являются сами зубы. Возможно, в них содержатся стволовые клетки, способные давать начало разнообразным тканям зуба, в том числе и эмали. Об этом свидетельствуют и такие факты: при повреждении зуба происходит естественная частичная регенерация дентина и других тканей. Так что можно предположить, что когда-нибудь новые зубы будут делать путем перекраивания старых.

 

Tissue Engineering of Complex Tooth Structures on Biodegradable Polymer Scaffolds. Conan S. Young, Shinichi Terada, Joseph P. Vacanti, Masaki Honda, John D. Bartlett and Pamela C. Yelick in Journal of Dental Research, Vol. 81, No. 10, pages 695–700; October 2002.

Stem Cell Based Tissue Engineering of Murine Teeth. A. Ohazama, S.A.C. Modino, I. Miletich and P. T. Sharpe in Journal of Dental Research, Vol. 83, No. 7, pages 518–522; July 2004.