19 мая 2003 15:19 |
Серологическая диагностика сифилиса
Серодиагностика применяется для подтверждения клинического диагноза сифилиса, постановки диагноза скрытого сифилиса, контроля за эффективностью лечения и как один из критериев излеченности больных сифилисом профилактического обследования определенных групп населения.
Некоторые аспекты иммунологии сифилиса. В иммунном ответе организма принимают участие как клеточные (макрофаги, Т-лимфоциты), так и гуморальные механизмы (синтез специфических Ig). Появление противосифилитических антител происходит в соответствии с общими закономерностями иммунного ответа: вначале вырабатываются IgM, по мере развития болезни начинает преобладать синтез IgG; IgA вырабатываются в сравнительно небольших количествах. Вопрос о синтезе IgE и IgD в настоящее время изучен недостаточно. IgM появляются на 2−4−й неделе после заражения и исчезают у нелеченных больных примерно через 18 мес.; при лечении раннего сифилиса — через 3−6 месяца, позднего — через 1 год. IgG появляются обычно на 4−й неделе после заражения и достигают, как правило, более высоких титров, чем IgM. Антитела этого класса могут сохраняться длительное время даже после клинического излечения больного.
Антигенное строение бледной трепонемы. Наиболее изучены следующие антигены.
1. Протеиновые антигены бледной трепонемы. Имеют в своем составе фракцию, общую для патогенных трепонем и сапрофитных трепонем, против которой синтезируются групповые антитела. Кроме того, имеется фракция, специфичная только для патогенных трепонем. Протеиновые антигены бледной трепонемы высокоиммуногенны, антитела против них появляются в организме в конце инкубационного периода или в течение первой недели после появления твердого шанкра.
2. Антигены полисахаридной природы. Малоиммуногенны, так как антитела против них не достигают значительных титров, поэтому роль этих антител в серодиагностике сифилиса незначительна.
3. Липидные антигены бледной трепонемы. Составляют около 30 % сухого веса клетки. Помимо липидов бледной трепонемы в организме больного появляется большое количество веществ липидной природы в результате разрушения клеток тканей, в основном липидов митохондриальных мембран. По-видимому, они 5имеют такое же строение, как и липидные антигены бледной трепонемы, и обладают свойствами аутоантигенов. Антитела в организме больного появляются примерно на 5−6−й неделе после заражения.
Современные методы серодиагностики сифилиса основаны на выявлении в организме больного антител разных классов. В зависимости от характера определяемых антител все серологические реакции на сифилис принято подразделять на специфические и неспецифические.
Неспецифические серологические реакции (КСР). Реакции этой группы основаны на выявлении в организме больного противолипидных антител. В основе всех реакций этой группы лежит один из двух принципов.
1. Реакции, основанные на принципе связывания комплемента. Реакция Вассермана (РВ) и ее многочисленные модификации. Эта реакция с целью серодиагностики сифилиса применяется в качественном и количественном вариантах, при постановке классическим методом и методом связывания на холоде. Реакция ставится с двумя антигенами: кардиолипиновым и трепонемным, приготовленным из разрушенной ультразвуком трепонемы Рейтера. В первичном периоде сифилиса реакция становится положительной через 2−3 недели после появления твердого шанкра или на 5−6−й неделе после заражения, во вторичном — почти у 100 % больных, в третичном активном 70−75 %, при спинной сухотке — у 50 %, прогрессивном параличе у 95−98 %. Реакция Вассермана часто дает неспецифические положительные результаты при бактериальных, вирусных и протозойных инфекциях, у больных со злокачественными новообразованиями, а также у здоровых лиц после употребления спиртных напитков. Нередко ложноположительные результаты реакции Вассермана наблюдаются у беременных женщин на восьмом месяце и после родов.
2. Реакции, основанные на принципе агглютинации кардиолипина. Микрореакции с плазмой крови и инактивированной сывороткой относятся к методам экспресс диагностики сифилиса. Микрореакции ставятся капельным способом с использованием специального антигена. Наиболее чувствительной и достаточно специфичной является реакция с плазмой. На втором месте по чувствительности и на первом по специфичности стоит реакция с инактивированной сывороткой. Эти реакции могут быть рекомендованы только как отборочные с последующим обследованием лиц с положительными результатами с использованием специфических реакций.
Специфические серологические реакции. В основе реакций этой группы лежит выявление антител к возбудителю заболевания — бледной трепонеме. В эту группу входят следующие реакции.
1. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Занимает центральное положение среди специфических реакций. Принцип ее в том, что исследуемой сывороткой обрабатывается антиген, который представляет собой бледная трепонема штамма Никольса, полученный из орхита кролика, высушенный на предметном стекле и зафиксированный ацетоном. После промывания препарат обрабатывается люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Флуоресцирующий комплекс (античеловеческий глобулин + флуоресцеин тиоизоционат) связывается с человеческим глобулином на поверхности бледной трепонемы и может быть идентифицирован методом люминесцентной микроскопии. Для серодиагностики сифилиса используется несколько модификаций РИФ.
А. Реакция иммунофлуоресценции с абсорбцией (РИФ-абс). Групповые антитела удаляются из исследуемой сыворотки с помощью разрушенных ультразвуком культуральных трепонем, что резко повышает специфичность реакции. А так как исследуемая сыворотка разводится только 1:5, то модификация сохраняет высокую чувствительность. По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает реакции Нельсона (РИТ), но намного проще в постановке. РИФ-абс становится положительной в начале 3−й неделе после заражения (до появления твердого шанкра или одновременно с ним) и является методом ранней серодиагностики сифилиса. Нередко сыворотка остается положительной и спустя несколько лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом — на протяжении десятилетий. Показания для постановки РИФ-абс:
— положительные результаты реакции Вассермана у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных, свидетельствующих о сифилисе;
— обследование лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, дающих положительные результаты при исследовании в реакции Вассермана;
— обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами в реакции Вассермана;
— обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами в реакции Вассермана;
— ранняя диагностика сифилиса;
— как критерий успешности противосифилитического лечения. Переход положительной РИФ-абс в отрицательную в результате проведенного лечения является 100 % критерием излеченности сифилиса.
Б. Реакция IgM-РИФ-абс. Выше упоминалось, что у больных ранним сифилисом в первые недели болезни появляются IgM, которые в данный период являются носителями специфических свойств сыворотки. В более поздние сроки болезни начинают преобладать IgG. Этот же класс иммуноглобулинов ответствен и за ложноположительные результаты, так как групповые антитела бывают результатом длительной по времени иммунизации сапрофитными трепонемами (полости рта, половых органов и др.). Раздельное изучение классов Ig представляет особый интерес при серодиагностике врожденного сифилиса, где противотрепонемные антитела, синтезированные в организме ребенка, будут представлены IgM, a IgG будут материнского происхождения. Реакция IgM-РИФ-абс основана на использовании во второй фазе коньюгата анти-IgM вместо античеловеческого флуоресцирующего глобулина. Показаниями к постановке этой реакции являются:
— серодиагностика врожденного сифилиса, так как реакция позволяет исключить IgG материнского происхождения, которые проходят через плаценту и могут обусловить ложноположительный результат РИФ-абс при отсутствии у ребенка активного сифилиса;
— дифференцировка реинфекции (повторного заражения) от рецидива сифилиса, при котором будет положительной РИФ-абс, но отрицательной IgM-РИФ-абс;
— оценка результатов лечения раннего сифилиса: при полноценном лечении IgM-РИФ-абс негативируется.
При постановке этой реакции в редких случаях могут наблюдаться ложноположительные и ложноотрицательные результаты.
В. Реакция 19SIgM−PИФ-a6c. В основе этой модификации РИФ лежит предварительное отделение более крупных молекул 19SIgM от более мелких молекул 7SIgM исследуемой сыворотки. Это может быть произведено с помощью гельфильтрации. Исследование в реакции РИФ-абс сыворотки, содержащей только фракцию 19SIgM, устраняет все возможные источники ошибок. Однако техника постановки реакции, особенно фракционирование исследуемой сыворотки, сложная и трудоемкая, что значительно ограничивает возможность ее практического использования.
2. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ). Это первая из специфических реакций, предложенная для серодиагностики сифилиса. Принцип ее заключается в том, что при смешивании сыворотки больного со взвесью живых патогенных бледных трепонем в присутствии комплемента утрачивается подвижность бледных трепонем, в то время как при смешивании взвеси бледных трепонем с сывороткой лиц, не больных сифилисом, подвижность бледных трепонем сохраняется длительное время. Выявляемые в этой реакции антитела-иммобилизины относятся к поздним антителам; они появляются позже комплементсвязывающих антител и достигают максимального титра к 10−му месяцу болезни. Поэтому как метод ранней диагностики реакция непригодна. Однако при вторичном нелеченном сифилисе реакция бывает положительной в 95 % случаев. При третичном сифилисе РИТ дает положительные результаты от 95 до 100 %. При сифилисе внутренних органов, ЦНС, врожденном сифилисе процент положительных результатов РИТ приближается к 100. Чувствительность и специфичность РИТ примерно такие же, как в РИФ-Абс, за исключением диагностики раннего сифилиса.
Негативация РИТ в результате полноценного лечения наступает не всегда; реакция может оставаться положительной на протяжении многих лет.
Показания к постановке реакций такие же, как для РИФ-абс. Из всех специфических реакций РИТ наиболее сложная и трудоемкая, поэтому за рубежом ее используют только при обследовании в сомнительных случаях.
3. Иммуноферментный анализ (ИФА). Принцип метода заключается в том, что антигенами бледной трепонемы сенсибилизируется поверхность твердофазового носителя (лунки панелей из полистирола или акрила). Затем в такие лунки вносится исследуемая сыворотка. При наличии в сыворотке антител против бледных трепонем образуется комплекс антиген + антитело, связанный с поверхностью носителя. На следующем этапе в лунки наливают антивидовую (против глобулинов человека) сыворотку, меченную ферментом (пероксидазой или щелочной фосфатазой). Меченые антитела (конъюгат) взаимодействуют с комплексом антиген + антитело, образуя новый комплекс. Для его выявления в лунки наливают раствор субстрата (5−аминосалициловая кислота). Под действием фермента субстрат меняет цвет, что указывает на положительный результат реакции. По чувствительности и специфичности метод близок к РИФ-абс. Показания к постановке ИФА такие же, как для РИФ-абс. Разработаны макро- и микроварианты ИФА. Реакция может быть автоматизирована.
4. Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА). Принцип заключает в том, что в качестве антигена используются формалинизированные и таннизированные эритроциты, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы. При добавлении такого антигена к сыворотке больного происходит склеивание эритроцитов — гемагглютинация. Специфичность и чувствительность реакции выше по сравнению с другими методами обнаружения антител к бледной трепонеме при условии высокого качества антигена. Реакция становится положительной на 3−й неделе после заражения и остается таковой спустя много лет после выздоровления. Число ложноположительных и ложноотрицательных результатов невелико. Разработан микрометод этой реакции, а также автоматизированная реакция микрогемагглютинации. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (Т. Pallidum haemagglutination).
5. Реакция гемабсорбции в твердой фазе (IgM-SPHA) (IgM — Solid phase haemadsorption). Это новая серологическая реакция, отвечающая, видимо, всем требованиям, предъявляемым к методам серодиагностики сифилиса. Реакция высокочувствительна и специфична, технически легко выполнима, становится положительной со 2−й недели после заражения. И хотя пока еще недостаточно фактического материала для объективной оценки ее достоинств и недостатков, реакция представляется весьма перспективной. Принцип ее заключается в том, что стенки лунок полистироловой панели покрываются анти-IgM против человеческой сыворотки. Затем в лунки наливается исследуемая сыворотка со специальным абсорбирующим разбавителем.
На третьем этапе в лунки вносят эритроцитарный диагностикум. В положительных случаях происходит гемагглютинация — эритроциты фиксируются на стенках лунок, в отрицательных эритроциты оседают на дно лунок в виде диска. Реакция может быть поставлена в качественном и количественном вариантах и доступна автоматизации.
Метки: Сифилис - симптомы и лечение
Смотри также
30 мая 2003 | 13:05
Применение трепонемных магнитных иммуносорбентов в иммуноферментном анализе для диагностики сифилиса.
Применение иммуносорбционных методов на основе иммобилизированных антигенов и антител является в последние годы одним из перспективных направлений в создании новых диагностических препаратов. Преимущества перед общепринятыми методами появились с началом применения сорбентов с магнитными свойствами...
16 мая 2003 | 16:05
Роль облигатной анаэробной флоры у женщин с инфекционными урогенитальными заболеваниями
Современная патология человека характеризуется изменением этиологической структуры инфекционных заболеваний, снижением удельного веса инфекций, вызываемых традиционными патогенами и возрастанием роли условно-патогенных и оппортунистических микроорганизмов.
05 мая 2003 | 14:05
Сифилис желудка
Понятие "сифилис желудка" является более собирательным, чем нозологическим, так как объединяет разнообразные клинико-морфологические проявления: от гастропатии при вторичном до язвенно-гуммозных поражений при третичном сифилисе. Диагноз сифилитического поражения желудка обычно ставится на основании данных клинико-лабораторных и патогистологических исследований.
14 апреля 2003 | 10:04
Применение полижинакса в комплексной терапии инфекций, передаваемых половым путем, у женщин
После того как Левенгук в конце XVII века изобрел микроскоп, было доказано, что здоровый человек является хозяином стабильной популяции микроорганизмов. В 1895 г. Додерлейн при микроскопии мазков из влагалища впервые обнаружил грамположительные палочки (называемые в настоящее время лактобактериями) и опубликовал классический материал о микробной флоре влагалища. По мере того как развивалась таксономия микроорганизмов и в диагностику внедрялись бактериологические среды, накапливалось все больше сведений о составе микрофлоры влагалища.
14 апреля 2003 | 10:04
Межведомственный подход к организации борьбы с венерическими болезнями на современном этапе
Обострившаяся проблема ИППП не обошла стороной еще недавно считавшуюся благополучной в этом отношении Челябинскую область, где проживают около 3,5 млн. человек. Население области, 80% которого сосредоточено в крупных промышленных центрах, пополняет значительное число мигрирующих граждан, среди них все больше так называемых асоциальных элементов — бродяжничающих лиц, не имеющих прописки, постоянного места жительства и работы, алкоголиков, наркоманов. В орбиту эпидемии ИППП оказались вовлечены все слои населения независимо от возраста, образования, профессии и социального положения, что подтверждает настоятельную необходимость в комплексном межведомственном подходе к планированию и проведению мероприятий по сдерживанию продолжающегося роста ИППП, а затем и снижению заболеваемости.
